TD 3 d'immunologie, Oran IGMO : Les Systèmes ABO et Rhésus

HISTORIQUE

Des progrès décisifs ont été obtenus en 1628 avec la découverte par William Harvey de la circulation sanguine et plus tard de la voie intraveineuse.

Le 15 juin 1667, Jean Baptiste Denis, un médecin français très réputé à l’époque, médecin personnel de Louis XIV, est le premier à faire injecter, de manière bien documentée, le sang d’un animal à un homme.

En 1668 : Antoine Mauroy, un malade qui présentait des accès de folie furieuse répétés, est transfusé par Jean Baptiste Denis avec du sang de veau à deux reprises. Il présente à la suite des symptômes aujourd'hui interprétables comme résultant d'une allergie : malaise, hématurie. Il décède à la suite d'une tentative de troisième transfusion.

En 1818 : pendant cette année, les premières transfusions de sang d’humain à humain ont lieu. Le sang des animaux n’est plus utilisé car trop de patients sont morts. On espère plus de résultats avec le sang humain mais les médecins à cette époque ignorent l'existence des groupes sanguins -système ABO et groupe rhésus.


En 1900 : l’Autrichien, Karl Landsteiner découvre la notion de différents groupes sanguins (A-B-O (le groupe AB a été découvert en 1901)), en comparant le sang de différents sujets. Il constate que le sang agglutine ou non avec les globules rouges des autres patients. Désormais la plupart des transfusions réussissent. Il obtient le prix Nobel de médecine en 1930.


En 1940 : Karl Landsteiner et son compatriote Wiener découvrent ensemble le facteur rhésus du nom du singe de race macaque ayant servi à l’expérience. Les transfusions deviennent de plus en plus sûres pour les receveurs.


(Karl Landsteiner)
A noter que, en hommage à sa contribution à la transfusion sanguine, la date du 14 juin, jour de sa naissance, a été retenue par l’OMS pour célébrer la journée internationale du don de sang.


Introduction :
Il existe à la surface des GR humains des Ag dont le type est génétiquement déterminé indépendamment des autres chez tous les individus.
Diverses catégories d’antigènes érythrocytaires représentent une vingtaine de groupes sanguins dont les principaux sont les systèmes ABO et Rhésus.



L’étude des systèmes ABO et Rhésus revêt plusieurs intérêts :
• L’importance de ces systèmes dans la sécurité transfusionnelle.
• Leur place dans la greffe d’organe surtout de la moelle osseuse.
• Leur intérêt dans l’immunohématologie et la thérapie cellulaire.
• La compréhension de ces systèmes permet de comprendre les mécanismes physiopathologiques de l’immunisation Fœto-maternelle.

1 Le système ABO :
Découvert en 1900 par Landsteiner, c'est un groupe tissulaire, car présent sur la plupart des cellules de l'organisme, y compris les globules rouges ou hématies.
Les antigènes du système ABO
Situés à la surface de la membrane cellulaire, ils sont au nombre de deux :
 - l'antigène A (N acétyl galactosamine),
 - et l'antigène B (D galactose).
Ainsi, selon la présence ou l'absence des antigènes A et B, on définit quatre groupes :



L’anticorps présent dans le sérum (dit "naturel") correspond toujours à l'antigène absent des globules rouges : loi de Landsteiner.
Par exemple, un sujet de groupe A possède, à la surface de ses hématies, l'antigène A, et dans son sérum l'anticorps anti-B.
Ces Ac sont synthétisés spontanément en dehors de toute stimulation antigénique, constamment présents en l’absence de l’antigène correspondant.
Ce sont des immunoglobulines de classe M.

Détermination des groupes ABO :

• Cette détermination passe par 2 étapes :

a- Epreuve de Beth Vincent : Cette épreuve consiste à mettre en évidence les antigènes du systeme ABO de la surface des globules rouges à l'aide d'anticorps (antisérum) spécifiques afin de déterminer le groupe ABO du patient. Lors de cette épreuve, il doit être utilisé un anti-A, un anti-B et un anti-AB (l'anti-B ne doit pas reconnaitre le B acquis). L'anti-A permettra de reconnaitre les individus possédant les antigènes A; l'anti-B les individus possédant l'antigène B et l'anti-AB les individus possédant l'antigène A et/ou l'antigène B.



voir la video :


b- Epreuve de Simonin : Recherche Des Ac naturels du plasma :
Cette épreuve consiste à mettre en évidence les anticorps du système ABO contenus dans le plasma du patient à l'aide de globules rouges de groupe ABO connu. Lors de cette épreuve, il est utilisé des globules rouges de groupe A1 et des globules rouges B (hors difficulté de groupe). Un individu de groupe A possède les anti-B, le plasma agglutinera donc avec les globules rouges de groupe B. Un individu de groupe B possède les anti-A, le plasma agglutinera donc avec les hématies de groupe A1. Les individus O possèdent les anti-A et les anti-B, le plasma agglutinera avec les hématies A1 et B, alors que les individus de groupe AB ne possèdent pas d'anticorps, il n'y aura donc aucune réaction avec les différentes hématies.



- Pratique du groupage
Matériel :
- Plaque d'opaline ( verre blanc opaque, carré blanc, ou carton laqué blanc),
 - Tubes sec.

Réactifs :
- pour le Beth Vincent = sérums test anti-A, anti-B, et si possible anti-A+B,
- pour le Simonin = globules rouges test de groupes A, B et O.

Technique :
- Sur plaque d'opaline
Disposer, toujours dans le même ordre, les gouttes de sérums test anti-A, anti-B, et éventuellement anti-A+B ; sur chaque goutte de sérum test, déposer une goutte de suspension globulaire à 10 % = Beth Vincent.
Disposer 3 x 1 goutte de sérum du patient sur chaque goutte de sérum, déposer une goutte de suspension globulaire à 10 % d'hématies connues A, B et 0 = Simonin.



Avec le fond d'un tube propre et sec, mélanger les 2 gouttes des zones de réaction une à une, d'un mouvement circulaire pour obtenir un rond d'environ 2 cm de diamètre, en prenant bien soin d'essuyer le fond du tube entre chaque réaction.
Chalouper la plaque d'opaline d'un mouvement circulaire horizontal légèrement oblique, de façon à imprimer un mouvement circulaire au contenu des zones de réaction.  Le liquide doit rester dans la zone circulaire de 2 cm délimitée à l'étape précédente.
S'il y a passage d'éléments d'une zone de réaction à une autre, il faut recommencer le test.


Résultats :


Réaction positive : les hématies agglutinées apparaissent comme des conglomérats rouges espacés de liquide clair et limpide de la couleur du réactif initial ou du sérum du patient.
Réaction négative : le mélange globules rouges/sérum donne une teinte homogène orangée.
Les résultats des deux techniques (Beth Vincent et Simonin) doivent être concordants pour valider le groupage

Interprétation :

Le système RH comprend une cinquantaine d’antigènes de nature polypeptidique. Seuls 5 d’entre eux présentent un intérêt clinique en médecine transfusionnelle. Il s’agit des antigènes D (RH1), C (RH2), E (RH3), c (RH4) et e (RH5).

Le plus important, car le plus immunogène, est l'antigène D.

Sa présence définit le caractère Rhésus positif, son absence, le caractère Rhésus négatif.

La présence de l'antigène à la surface des hématies, mise en évidence par l'anticorps correspondant, définit, comme dans le système ABO, le groupe sanguin.

Contrairement aux anticorps anti -A ou anti -B dits naturels, la grande majorité des anticorps dans le système Rhésus résulte d’une  réponse immunitaire induite par une grossesse ou une transfusion sanguine incompatible.

Lors de l’accouchement, des globules rouges du bébé peuvent passer la barrière placentaire pour se mélanger aux globules rouges de la mère.

Si une mère est Rh-et le père Rh +, l’enfant sera Rh+ ; la mère risque alors après l ‘accouchement de fabriquer des anticorps anti-D. S’il y a une nouvelle grossesse avec un père Rh +, et donc un bébé Rh + les anticorps anti-D de la mère risquent de provoquer une hémolyse chez le bébé toujoursau moment de l ‘accouchement. Pour prévenir ce risque 72 heures (maximum) après un accouchement d’un bébé Rh + on injecte à la mère une dose de gammaglobuline anti-D qui va neutraliser les globules rouges porteurs de l’antigène D (Rh+) du bébé; la mère ne fabriquera donc pas d’anticorps anti-D.