Préparation du milieu nutritif (gélose)

[youtube][/youtube]




Préparation d'une gélose nutritive.





Une gélose nutritive est un substrat de laboratoire utilisé entre autre pour la microbiologie.

Il s'agit d'une préparation liquide qui se gélifie grâce à l'agar à température ambiante.

On verse cette
préparation dans des boites de pétri qui sont alors mises en incubation
après que la souche a développer aie été placé sur le milieu.



Il existe diverses recettes, voici celles utilisées principalement en champiculture :



Le milieu MYA (Malt, Yeast, Agar) simple et adapté à la champiculture en général

1 Litre d’eau

20 grammes d’agar-agar

20 grammes d’extrait de malt

2 grammes de levures



Le milieu MYPA (Malt, Yeast, Peptone, Agar)

1 Litre d’eau

20 grammes d’agar-agar

20 grammes d’extrait de malt

2 grammes de levures

1 gramme de peptone



Le milieu PDYA (Potato, Dextrose, Yeast, Agar)

700mL d’eau

300mL d’eau de cuisson de pomme de terre (coupez 300g pommes de terre
en morceaux moyens et faites les cuire dans 2-3L d’eau pendant 1 heure,
filtrez l’eau de cuisson avant utilisation)

20g d’agar-agar

10g de dextrose

2g de levures

1g de peptone (optionnel pour obtenir un milieu PDYPA)



Le milieu OMYA (Oatlmeal, Malt, Yeast, Agar)

1 Litre d’eau

80g de flocon d’avoine

20g d’agar-agar

10g d’extrait de malt

2g de levures

C’est un milieu de culture très riche dont vous pouvez filtrer ou non l’avoine avant de l’utiliser.



Le milieu DFA (Dog Fod Agar)

1 Litre d’eau

20g d’agar-agar

20g de croquettes de chien broyées en poudre



Le milieu CMYA (Cornmeal, Malt, Yeast, Agar)

1 Liter d’eau

20g d’agar-agar

10g de semoule de mais (sans fongicide)

5g de malt ou de glucose

1g de levures

Ce milieu n’est pas aussi nutritif que les autres, il est utilisé en laboratoire pour stocker les cultures.

Une fois que vous savez quel milieu vous utiliserez, il faut préparer la gélose.

Voici la procédure à suivre :



Réunissez tout les ingrédients nécessaires et mettez les dans une casserole.

	Portez à ébullition et coupez le feu aussitôt.
	Versez ensuite votre préparation dans un récipient en verre avec un col étroit (désinfecté à l’alcool ou à l’eau de Javel) assez grand mais rentrant dans votre stérilisateur. Recouvrez votre récipient avec du papier d’aluminium pour éviter que votre mélange s’évapore. Placez votre préparation dans votre auto-cuiseur et effectuez une stérilisation en cocotte minute pendant 25 à 30 minutes.
	Laissez un peu refroidir votre récipient avant de verser la préparation dans vos boites de Pétri (environ 0,4cm) en respectant les consignes de stérilité. Un litre de préparation vous permettra de remplir 35 à 40 boites de Pétri. Laissez les refroidir et lorsque l’agar est durci, les boîtes de Pétri sont prêtes pour l’inoculation mais avant je vous recommande de les placer dans votre incubateur pendant 48h afin d’observer si une contamination se développe.

Si vous n’utilisez pas toutes les boîtes de Pétri coulées, vous
pouvez les sceller avec du film alimentaire et les conserver dans un
réfrigérateur propre pendant 1 ou 2 mois.



Source : www.champignonscomestibles.com

merci bcp